【摘要】目的：研究S100A4蛋白和上皮鈣粘蛋白(Ecadherin，Ecad)在人類上皮性卵巢腫瘤中的表達情況，探討并分析兩者與上皮性卵巢癌的浸潤、轉(zhuǎn)移發(fā)生的關(guān)系及其生物學(xué)意義。方法：采用免疫組織化學(xué)法SP法檢測S100A4蛋白和Ecad在上皮性卵巢腫瘤中的表達與分布，結(jié)合臨床病理情況分析兩者與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果：上皮性卵巢癌中S100A4的表達率比卵巢良性腫瘤和上皮性卵巢交界性腫瘤中的表達率增高(P<0.05);S100A4在上皮性卵巢癌中的表達與組織學(xué)分級、有無轉(zhuǎn)移、有無腹水有關(guān)(P<0.05)，與臨床病理分期無關(guān)(P>0.05);Ecad在上皮性卵巢癌的表達與臨床分期、有無轉(zhuǎn)移、有無腹水有關(guān)(P<0.05)，而與組織學(xué)分級無關(guān)(P>0.05);S100A4,Ecad在上皮性卵巢癌中的表達與有無絕經(jīng)、腫瘤大小、臨床病理類型無關(guān)(P>0.05);上皮性卵巢癌中S100A4和Ecad的表達呈負相關(guān)(r=-0。385，P<0.05)。結(jié)論：S100A4和Ecad的相關(guān)表達與上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，是判斷上皮性卵巢癌生物學(xué)行為、預(yù)測侵襲轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】卵巢腫瘤;S100A4;鈣粘著糖蛋白類;腫瘤轉(zhuǎn)移

引言

侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者死亡的重要原因，腫瘤的轉(zhuǎn)移包括細胞骨架的丟失、癌細胞的脫落等過程，此過程與Ecad和轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白S100A4有非常密切的關(guān)系。S100A4蛋白是最近從S100蛋白家族篩選的一個與惡性腫瘤預(yù)后相關(guān)的一個因子^①，Ecad分布于細胞細胞黏附連接處，是介導(dǎo)相鄰細胞的同型黏附，其異常表達促使惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移^②。我們探討S100A4和Ecad的表達與上皮性卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，為臨床上上皮性卵巢癌的診斷治療、預(yù)后評估提供依據(jù)。

1、材料和方法

1.1 材料

標(biāo)本取自陜西省婦幼保健院和渭南市中心醫(yī)院200401/200703手術(shù)切除的上皮性卵巢腫瘤48例，均經(jīng)40g/L甲醛固定、常規(guī)脫水、包埋。其中良性上皮性卵巢腫瘤10例(漿液性囊腺瘤6例，黏液性囊腺瘤4例)，交界性卵巢腫瘤8例(漿液性交界性囊腺瘤5例，黏液性交界性囊腺瘤3例)，上皮性卵巢癌30例(漿液性卵巢癌18例，黏液性卵巢癌12例)，在卵巢癌患者中，所有患者術(shù)前均無化療放療史，無煙酒毒物接觸史，無癌癥家族史，按照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2000年標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ期6例，Ⅱ期8例，Ⅲ期9例，Ⅳ期7例;組織學(xué)分級：按WHO分級標(biāo)準(zhǔn)：其中Ⅰ級10例，Ⅱ級8例，Ⅲ級12例，并取同時期手術(shù)因其他良性疾病而切除的正常卵巢組織6例，所有患者年齡在30~69歲之間。

1.2 方法

S100A4多克隆抗體和EcadmAb購自北京中杉生物技術(shù)公司，組化染色按SP試劑盒提供的說明書進行，中杉公司提供的陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗行陰性對照。每張切片隨機選擇5個高倍視野，采用半定量計分法判定結(jié)果。Ecad以胞膜呈黃色或棕黃色為陽性細胞，按陽性細胞所占比例^③④計算陽性細胞百分?jǐn)?shù)，膜著色連續(xù)清楚且陽性細胞數(shù)>75%定義為4分，著色淡不連續(xù)且陽性細胞數(shù)50%～75%定義為3分，陽性細胞數(shù)25%～50%定義為2分，陽性細胞數(shù)<25%為1分，著色為棕黃色為3分，著色為黃色為2分，著色為淡黃色為1分，基本不著色為0分，>10%的細胞質(zhì)或胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒定義為異位表達，將每張切片平均著色程度得分與平均著色細胞百分率得分相乘為其最后得分，總分≥6者為陽性表達，總分<6者為膜表達減弱，膜表達減弱或異位表達統(tǒng)一定義為陰性表達。S100A4的染色結(jié)果判定：S100A4以胞質(zhì)或胞核出現(xiàn)黃色顆粒為陽性細胞，高倍鏡下將陽性細胞數(shù)<10%為1分，陽性細胞數(shù)在10%~50%為2分，陽性細胞數(shù)>50%為3分，將<3分者為S100A4陰性表達，等于3分為陽性表達。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理：采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS11.5進行分析，樣本率的比較用χ2檢驗或Fisher確切概率法，S100A4與Ecad表達的相關(guān)性分析用Spearman等級相關(guān)法，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2、結(jié)果

2.1 S100A4及Ecad在正常卵巢組織和上皮性卵巢腫瘤中的表達 S100A4在胞質(zhì)中表達，Ecad在胞膜中表達，且都在相應(yīng)部位呈棕黃色或棕褐色。S100A4和Ecad在正常卵巢組織無表達，Ecad表達從良性組、交界性組、惡性組呈逐漸減低的趨勢，而S100A4呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢，惡性組分別與良性組交界性組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。S100A4和Ecad在上皮性卵巢腫瘤中的表達

2.2 S100A4，Ecad的表達與上皮性卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系S100A4的表達 與組織分化、有無腹水、轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05);而與其他參數(shù)無關(guān)(P>0.05);組織分化越低，S100A4的表達越高(P<0.05);雖然S100A4在晚期卵巢癌的表達比早期卵巢癌增高，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);Ecad的表達與臨床分期、有無轉(zhuǎn)移以及有無腹水有關(guān)(P<0.05,S100A4和Ecad表達與上皮性卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 S100A4和Ecad表達的相關(guān)性  30例上皮性卵巢癌組織中S100A4陽性表達和Ecad陰性表達的共有15例，相關(guān)性分析結(jié)果顯示，卵巢癌組織中S100A4和Ecad的表達呈負相關(guān)(r=-0.385，P<0.05)。

3、討論

S100A4是一個與惡性腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移等病理過程密切相關(guān)的蛋白，Kerisebilck等^⑤報道S100A4基因轉(zhuǎn)染小鼠乳腺細胞系后，細胞Ecad基因的表達減低，且細胞中catenin分布狀態(tài)發(fā)生紊亂，使Ecad不能正常介導(dǎo)同型細胞間的黏附，腫瘤細胞易脫離母體腫瘤而發(fā)生轉(zhuǎn)移。S100A4蛋白以共價鍵二聚體和非公價鍵二聚體存在于體內(nèi)，以共價鍵二聚體存在于細胞間質(zhì)中的S100A4蛋白的存在是細胞間信號傳導(dǎo)，細胞與細胞基質(zhì)相互作用的基礎(chǔ)，也是腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)，也是腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的病理基礎(chǔ)^①。Cho等^⑥研究發(fā)現(xiàn)S100A4的表達與結(jié)直腸癌的腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率密切相關(guān)，但與腫瘤的定位、大小及患者的生存時間無關(guān)。隨后對癌組織進行S100A4基因突變的檢測，結(jié)果無S100A4基因突變的存在。

Jenkinson等^⑦研究發(fā)現(xiàn)S100A4蛋白的表達與細胞的異常增生及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本試驗研究結(jié)果顯示S100A4的陽性表達與臨床分期無關(guān)，雖然有報道S100A4在肺癌、結(jié)直腸癌的表達與臨床分期有關(guān)，但與Kikuchi等^④的研究結(jié)果一致，而且在Kikuchi的研究中發(fā)現(xiàn)對于同一期別的卵巢癌患者，S100A4在胞核的表達越高，與無胞核表達的組織相比，患者的生存期明顯縮短，特別是對于Ⅰ/Ⅱ期的卵巢癌患者。

現(xiàn)有研究表明Ecad表達變化可能與以下機制有關(guān)，如Ecad基因突變，基因啟動子的甲基化，基因啟動子上單個核苷酸的多態(tài)性以及腫瘤部位的蛋白酶活性升高等^⑧。本研究證實正常卵巢上皮細胞不表達Ecad，而在卵巢良性腫瘤中Ecad表達增高，可能Ecad在卵巢新生物的形成及向惡性發(fā)展過程中行使某種功能^⑨。本研究中我們發(fā)現(xiàn)Ecad的陽性表達與臨床分期有關(guān)，分期為Ⅰ,Ⅱ期者表達高于Ⅲ,Ⅳ期，表明Ecad與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)。Ecad表達下調(diào)將使同種細胞失去黏附，正常組織不能發(fā)育成形。對于惡性腫瘤而言則細胞極性喪失、呈現(xiàn)惡性細胞形態(tài)并具備侵襲性生長的特性。當(dāng)Ecad活性正常瘤細胞不易從原發(fā)灶上脫落下來，而當(dāng)Ecad失活導(dǎo)致細胞間黏附作用下降和極性紊亂，促使腫瘤的轉(zhuǎn)移^⑩。研究發(fā)現(xiàn)，在膀胱癌、肺癌、腎癌、大腸癌等大多數(shù)腫瘤中均有Ecad的表達減弱或缺失，且與腫瘤的臨床分期，組織分化、浸潤轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)有密切關(guān)系，是預(yù)示腫瘤進展及預(yù)后的重要指標(biāo)之一^⑾，本試驗中我們發(fā)現(xiàn)分化程度低者，Ecad的陽性表達也偏低，但無統(tǒng)計學(xué)意義，可能與我們的結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)。我們研究發(fā)現(xiàn)Ecad在惡性腫瘤中部分在胞質(zhì)表達可能是無功能的Ecad經(jīng)蛋白水解，產(chǎn)物釋放入胞質(zhì)所致。雖然S100A4和Ecad的表達呈負相關(guān)有待進一步研究，但S100A4可能通過肌動蛋白細胞骨架動力促進細胞運動，引起Ecad表達下調(diào)，使其不能介導(dǎo)同種細胞的黏附，使腫瘤細胞脫離母體腫瘤而發(fā)生轉(zhuǎn)移^⑿。

近幾年對S100A4蛋白與腫瘤生物學(xué)行為的研究已受到重視，其在多種腫瘤的研究已相繼開展，然而S100蛋白促腫瘤發(fā)生發(fā)展作用的具體機制尚未完全闡明，有待進一步研究。S100A4蛋白和Ecad的關(guān)系密切，可能成為判斷腫瘤預(yù)后的一個指標(biāo)，為指導(dǎo)臨床治療提供一定的依據(jù)。

【參考文獻】

[1]Mazzuccheli L.Protein S100A4: Too Long Overlooked by Pathologists[J]? Am J Pathol,2002,160(1):7-13.

[2]Cobanoglu U,Ersoz S,Turgutalp H,et al.Correlation of Ecadherin expression with clinicopathological parameters in breast carcinoma[J].Saudi Med J,2004,25 (8):1024-1027.

[3]Kim JC,Roh SA,Kim HC,et al.Coexpression of carcinombryonic antigen and Ecadherin in colorectal adenocarcinoma with liver metastasis[J].J Gastrointest Surg，2003，7(7):931-938.

[4]Kikuchi N,Horiuchi A,Osada R,et al.Nuclear expression of S100A4 is associated with aggressive behavior of epithelial ovarian carcinoma:An important autocrine/paracrine factor in tumor progression[J].Jpn Cancer Assoc，2006，97(10):1061-1069.

[5]Keirsebilck A,Bonne S,Bruyneel E,et al.Ecadherin and metastasis (mts1/ S100A4) expression levels are inversely regulated in two tumor cell families.Cancer Res,1998,58(20):4587-4591.

[6]Cho YG,Kim CJ,Nam SW,et al.Overexpression of S100A4 is closely associated with progression of colorectal cancer [J].World J Gastroerrterol，2005，11 (31):4852-4856.

[7]Jenkinson S R,Barraclough R,West C R,et al.S100A4 regulates cell motility and invasion in an in vitro model for breast cancer metastasis [J].Br J Cancer,2004,90(1):253-262.

[8]Lee JO,Kwun HJ,Jung JK,et al.Hepatitis B virus X protein represses Ecadherin expression via activation of DNA methyltransferase1 [J].Oncogene, 2005,24(44): 6617-6625.

[9]Alper O,Marta L,Santis DE,et al.Anti-sense suppression of epidermal growth factor receptor expression alters cellular proliferation,cell-adhesion and tumorigenicity in ovarian cancer cells1[J].Int J Cancer,2000, 88(4):566-574.

[10]Cobanoglu U,Ersoz S,Turgutalp H,et al.Correlation of Ecadherin expression with clinicopathological parameters in breast carcinoma[J].Saudi Med J,2004,25 (8):1024-1027.

[11]Zhang S,Ji W,Liu C,et al.The relation of metastasis and prognosis with transforming growth factorbetal and Ecadherin exp ression in sup raglottic larynx squamous cell carcijnoma[J].Linchuang Erbiyanhouke Zazhi, 2006,20 (12):534537.

[12]Moriyama Kita M,Endo Y,Yonemura Y,et al.S100A4 regulates Ecadherin expression in oral squamous cell carcinoma[J].Cancer Lett，2005，230(2):211-218.